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283次應(yīng)注意可測(cè)范圍與線(xiàn)性范圍的不同,線(xiàn)性范圍常小于可測(cè)范圍,比如某一酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍為0.000~2.900,而其線(xiàn)性范圍僅0.000~2.000,這在定量ELISA試劑盒中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)應(yīng)予注意。酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱(chēng)酶標(biāo)儀,通常指于測(cè)讀 ELISA試劑盒結(jié)果吸光度的光度計(jì)。針對(duì)固相載體形式的不同,各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計(jì)。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、度和可測(cè)范圍、線(xiàn)性等等。
優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.0 01, 準(zhǔn)確性為±1%,重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說(shuō),若某孔測(cè)得的A 值為1.083,則該孔相對(duì)于空氣的真實(shí)A 值應(yīng)為1.083± 0.01(1.073~1.093 ),重復(fù)測(cè)定數(shù)次,其A 值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088 )在之間。酶標(biāo)儀的可測(cè)范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,新型號(hào)的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900,甚至更高。ELISA試劑盒超出可測(cè)上限的A 值常以"*"或"over"或其它符號(hào)表示。
酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下,操作時(shí)室溫宜在15~30℃,使用前先預(yù)熱儀器15-30 分鐘。測(cè)讀 A 值時(shí),要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD 用492nm 波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀,即每孔先后測(cè)讀兩次,*次在zui適波長(zhǎng)(W1),第二次在不敏感波長(zhǎng)(W2),ELISA試劑盒兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA 板的位置。例如OPD 用492nm 為W1,630nm 為W 2,zui終測(cè)得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。各種酶標(biāo)儀性能有所不同,使用中應(yīng)詳細(xì)新聞?dòng)浾哒f(shuō)明書(shū)。
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