ELISA試劑盒的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反應(yīng)，并通過酶催化底物發(fā)生化學(xué)變化將抗原抗體反應(yīng)通過顏色的形式顯現(xiàn)出來。主要步驟分為如下5個部分：
（1）將抗原抗體反應(yīng)固相化：即試驗中的包被環(huán)節(jié)，ELISA試劑盒使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團(tuán)可以無選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結(jié)構(gòu)，保持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性； 
（2）封閉：固相吸附蛋白是非特異性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力，為了保障，因此，ELISA試劑盒包被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無關(guān)蛋白封閉。一般認(rèn)為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑，也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
（3）抗原抗體反應(yīng)：抗原或抗體在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)下可進(jìn)行特異的抗原抗體反應(yīng)。
（4）酶反應(yīng)：酶可以通過共價鍵與抗原或抗體連接形成結(jié)合物，當(dāng)抗原抗體反應(yīng)的時候，被檢測靶目標(biāo)中也結(jié)合了酶分子。
（5）底物反應(yīng)：結(jié)合在抗原抗體中的酶分子，可以促使底物發(fā)生顏色反應(yīng)，ELISA試劑盒檢測人員可以通過顏色來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，并可通過顏色的深淺判斷標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的含量（顏色反應(yīng)與抗原抗體的含量成正比），可以裸眼觀察，也可借用酶標(biāo)儀在適當(dāng)?shù)牟ㄩL讀取吸光度值。