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上海一研生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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免疫濁度技術(shù)的類(lèi)型有哪些

時(shí)間:2017/5/23閱讀:1732
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(一)VE Elisa Kit透射光免疫濁度技術(shù)
透射光免疫濁度技術(shù)是一種極為簡(jiǎn)單的方法,測(cè)量方式是測(cè)定入射光因反射、吸收或散射后的衰減,讀數(shù)以吸光度A(或光密度OD)表示,A值反映了入射光強(qiáng)度和透射光強(qiáng)度的關(guān)系。免疫復(fù)合物直徑為35-lOOnm,這一范圍要求近紫外光處入射光發(fā)出zui大的干擾(zui大吸收峰),選擇290-410nm波長(zhǎng)測(cè)。由于抗原抗體結(jié)合后在短時(shí)間內(nèi)(<19s)只能形成小復(fù)合物,無(wú)法進(jìn)行比濁,需要等幾分鐘到數(shù)小時(shí)(>19s)形成可見(jiàn)的復(fù)合物,才能進(jìn)行比濁。為了提高復(fù)合物形成速度,加入促聚劑,如4%聚乙二醇(MW:6 000~8 000),可使復(fù)合物形成在3—10rain完成。
 
(二)終點(diǎn)散射比濁技術(shù)
終點(diǎn)法是指在抗原抗體結(jié)合完成后進(jìn)行免疫復(fù)合物的定性或定量測(cè)定。散射比濁應(yīng)用越來(lái)越多,且有替代其他免疫定量法的趨勢(shì)。散射比濁的原理是依據(jù)雷利(Rayleigh)公式提出的,當(dāng)復(fù)合物較小時(shí)(<3×106Dal)(1Dal≈1u),呈全透射,透射與散射相當(dāng)。當(dāng)復(fù)合物大于入射光波長(zhǎng)的l/20時(shí),形成不對(duì)稱(chēng)的前向散射,在900以前的角度測(cè)量散射光皆可取得好的效果,散射光的量代表復(fù)合物的量。散射比濁測(cè)定法是在光路的50~900角方向上測(cè)定散射光的強(qiáng)度。VE Elisa Kit復(fù)合物的粒子隨散射角度而異,大的散射光角度適于35一lOOnm的微粒,較小的散射光角度適于100—800nm的微粒測(cè)定。散射比濁法在許多自動(dòng)化儀器上皆有測(cè)試程序,大多為終點(diǎn)法,該法穩(wěn)定性好。
 
(三)速率散射比濁技術(shù)
所謂速率,是在某一單位時(shí)間內(nèi)形成大于3×106Dal(1Dal≈lu)以上的復(fù)合物量(不是積累數(shù)),當(dāng)儀器測(cè)定到某一單位時(shí)間內(nèi)形成的速率下降時(shí),即出現(xiàn)速率峰,該峰值的高低,即代表抗原的量。該技術(shù)有3大特點(diǎn):①時(shí)間快,一般在30~60s就可完成測(cè)試;②準(zhǔn)確,因其只測(cè)定形成速率,抗原越多速率越快;③節(jié)省試劑。此外,速率法的靈敏度與特異性都優(yōu)于終點(diǎn)法,前者的靈敏度比后者高出3個(gè)數(shù)量級(jí)之多。
 
(四)粒子強(qiáng)化免疫濁度測(cè)定技術(shù)
粒子強(qiáng)化免疫濁度測(cè)定技術(shù)的基本原理是選擇一種大小適中、均勻一致的膠乳顆粒,吸附或交聯(lián)抗體后,當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時(shí),則發(fā)生聚集。單個(gè)膠乳顆粒在入射光波長(zhǎng)之內(nèi),光線可透過(guò)。當(dāng)兩個(gè)膠乳顆粒凝聚時(shí),則使透過(guò)光減少,這種減少的程度與膠乳凝集成正比,當(dāng)然也與待測(cè)抗原量成正比。此法靈敏度較高,可達(dá)ng/m1或pg/ml水平。該技術(shù)的關(guān)鍵在于兩個(gè)方面:首先是選擇適用的膠乳,其大小(直徑)要稍小于波長(zhǎng),用500nm波長(zhǎng)者選擇lOOnm顆粒較適合,用585nm波長(zhǎng)者則選用100~200nm顆粒為好,目前多用200nm的膠乳顆粒;其次,膠乳與抗體結(jié)合時(shí)用化學(xué)交聯(lián)雖好,但失活也較嚴(yán)重,VE Elisa Kit一般用吸附法即可。

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