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鴨極低密度脂蛋白(VLDL)酶聯(lián)免疫elisa分析試劑盒的間接法

時間:2020/12/22閱讀:1154
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鴨極低密度脂蛋白(VLDL)酶聯(lián)免疫elisa分析試劑盒檢測未知抗體的間接法:
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。
 
2.次日洗滌3次。
 
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,一遍用DDW洗滌。
 
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
 
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

競爭法的簡要操作步驟:
1)先加入特異性抗原,使抗原固定結合于載體表面;
2)加入梯度濃度比例的待測樣品與酶標抗體混合物,并做只加酶標抗體的對照組;
3)加入酶促反應底物,發(fā)生顯色反應,對比實驗組及對照組的顯色差異,計算未知抗體的量。

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