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大鼠骨形成蛋白-2(BMP-2)酶聯(lián)免疫分析操作步驟

時間:2019/4/17閱讀:1393
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大鼠骨形成蛋白-2(BMP-2)酶聯(lián)免疫分析操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

8μg/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

4μg/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2μg/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

1μg/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

0.5μg/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,

然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此

重復(fù)5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止

液后15 分鐘以內(nèi)進行。

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