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南京科捷檢測科技發(fā)展有限公司
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閱讀：950發(fā)布時間：2020-7-28
金銀花為名貴中藥材之一，具有清熱解毒，疏散風熱等功效，自古以來，就被民間廣泛使用。金銀花葉作為金銀花藥材的一種副產(chǎn)物，產(chǎn)量較大，但長期以來都作為非藥用部分而未得到利用。研究表明，金銀花和金銀花葉中都含有一定量的黃酮，這些黃酮類物質(zhì)具有抗炎、抗高血壓、抗癌等藥理作用，是金銀花及葉中的主要活性成分之一。目前黃酮類化合物的測定方法有紫外分光光度法、鋁鹽顯色分光光度法、梯度洗脫反相高效液相色譜法等，而且主要以分光光度法為主測定總黃酮的含量。應用高效液相色譜法測定的還較少。本實驗采用反相高效液相色譜法，直接對金銀花及葉中的黃酮類物質(zhì)槲皮素和木犀草素進行分離與測定，方法簡便快速，結(jié)果可靠，為金銀花及葉中黃酮類物質(zhì)的研究提供了參考。
儀器準備
儀器簡介
LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時控制數(shù)臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等，實行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。
應用領(lǐng)域
化合物檢測、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學食品檢測、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析
供試品溶液制備：
分別稱取5g經(jīng)過干燥粉碎的金銀花和金銀花葉各一份，用100ml甲醇在40℃超聲提取30min，過濾，減壓濃縮，濃縮液用石油醚除雜，然后用甲醇定容至25ml容量瓶，即得到金銀花和金銀花葉的供試品溶液。
色譜條件：
色譜柱 | Zorbax 80A，Extend c18柱（4.6mm×250mm×5μm） |
流動相 | 甲醇：0.02%磷酸（50:50） |
流速 | 1.0mL/min |
檢測波長 | 350nm |
柱溫 | 30℃ |
進樣量 | 10μL |
測定結(jié)果：
分別對槲皮素和木犀草素的對照品溶液在200-900nm進行紫外掃描，二者的**大和次大吸收峰分別在350nm和255nm，由于在350nm吸收**強，且干擾較少，故選用350nm作為檢測波長。在實驗時，用甲醇超聲提取金銀花和金銀花葉中的黃酮類化合物，然后過濾，減壓濃縮，濃縮液用石油醚除雜后定容檢測，這樣得到的色譜峰形好，雜質(zhì)峰較少，比直接將濃縮液定容檢測效果要理想。
本研究表明，采用反相高效液相色譜法直接對金銀花及葉中的黃酮類物質(zhì)槲皮素和木犀草素進行分離與測定，此方法簡便快捷，結(jié)果可靠。
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