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高效液相色譜法測定金銀花及葉中的黃酮類物質(zhì)

閱讀:950發(fā)布時間:2020-7-28

  金銀花為名貴中藥材之一,具有清熱解毒,疏散風熱等功效,自古以來,就被民間廣泛使用。金銀花葉作為金銀花藥材的一種副產(chǎn)物,產(chǎn)量較大,但長期以來都作為非藥用部分而未得到利用。研究表明,金銀花和金銀花葉中都含有一定量的黃酮,這些黃酮類物質(zhì)具有抗炎、抗高血壓、抗癌等藥理作用,是金銀花及葉中的主要活性成分之一。目前黃酮類化合物的測定方法有紫外分光光度法、鋁鹽顯色分光光度法、梯度洗脫反相高效液相色譜法等,而且主要以分光光度法為主測定總黃酮的含量。應用高效液相色譜法測定的還較少。本實驗采用反相高效液相色譜法,直接對金銀花及葉中的黃酮類物質(zhì)槲皮素和木犀草素進行分離與測定,方法簡便快速,結(jié)果可靠,為金銀花及葉中黃酮類物質(zhì)的研究提供了參考。

 儀器準備

 

儀器簡介

    LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時控制數(shù)臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等,實行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。

 

應用領(lǐng)域

化合物檢測、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學食品檢測、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析

 

供試品溶液制備:

分別稱取5g經(jīng)過干燥粉碎的金銀花和金銀花葉各一份,用100ml甲醇在40℃超聲提取30min,過濾,減壓濃縮,濃縮液用石油醚除雜,然后用甲醇定容至25ml容量瓶,即得到金銀花和金銀花葉的供試品溶液。

譜條件:

 

色譜柱

Zorbax 80A,Extend c18柱(4.6mm×250mm×5μm)

流動相

甲醇:0.02%磷酸(50:50)

流速

1.0mL/min

檢測波長

350nm

柱溫

30℃

進樣量

10μL

 

 

 

測定結(jié)果

分別對槲皮素和木犀草素的對照品溶液在200-900nm進行紫外掃描,二者的**大和次大吸收峰分別在350nm和255nm,由于在350nm吸收**,且干擾較少,故選用350nm作為檢測波長。在實驗時,用甲醇超聲提取金銀花和金銀花葉中的黃酮類化合物,然后過濾,減壓濃縮,濃縮液用石油醚除雜后定容檢測,這樣得到的色譜峰形好,雜質(zhì)峰較少,比直接將濃縮液定容檢測效果要理想。

本研究表明,采用反相高效液相色譜法直接對金銀花及葉中的黃酮類物質(zhì)槲皮素和木犀草素進行分離與測定,此方法簡便快捷,結(jié)果可靠。

 


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