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上海哈靈生物科技有限公司
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吖啶橙染色液說明書
2015-5-27 閱讀(1066)
簡介：吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性，能透過細胞膜，使核DNA和RNA染色。因此AO常用于細胞內(nèi)DNA和RNA進行檢測。哈靈生物吖啶橙染色液(1mg/ml)為儲存液，使用時應(yīng)稀釋到合適濃度后使用。染色后在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒；而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。
規(guī)格：10ml 保存條件：4℃ 避光
操作步驟(僅供參考)：
1、 收集細胞(采用流式細胞儀檢測時，應(yīng)先固定細胞)，用PBS清洗細胞1次，計數(shù)并調(diào)節(jié) 細胞濃度至106/ml。
2、 取適量的細胞懸液，加入Acridine Orange Stain(1mg/ml)，輕輕混勻。
3、 室溫避光染色15～20ml，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細胞儀分析。
4、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長488nm，阻斷濾光片波長515nm)，計數(shù)并拍照。
染色結(jié)果：正常細胞 細胞被均勻染成黃綠色熒光凋亡細胞染色質(zhì)濃縮，細胞核碎裂成點狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒
注意事項：
1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜劑，較少單獨使用。
2、吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。
3、如有低溫離心機進行離心效果更佳。
4、操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強光下的時間。
