亚洲精品中文视频,在线观看aaa,丁香五月欧美成人,亚洲成人高清,成人免费观看视频在线观看,在线日韩中文,成人av免费播放

上海哈靈生物科技有限公司

主營產(chǎn)品: ELISA代測服務(wù),ELISA試劑盒價格,ELISA試劑盒,ELISA試劑盒說明書,大鼠ELISA試劑盒

13

聯(lián)系電話

18918128223

您現(xiàn)在的位置: 首頁> 技術(shù)文章 > 重組人乙酰膽堿酯酶治療有機磷效果研究

公司信息

聯(lián)人:
何經(jīng)理
話:
機:
18918128223
真:
86-021-51010234
址:
國定東路200號
編:
200433
網(wǎng)址:
www.halingbio.com/
鋪:
http://m.mividagoldenbeach.com/st102751/
微信掃碼進入微名片
給他留言

重組人乙酰膽堿酯酶治療有機磷效果研究

2013-11-27  閱讀(735)

對重組人乙酰膽堿酯酶其分子特性和生物學(xué)特性進行篩選。

 

        為進一步rhAChE的體內(nèi)研究及臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ),從而為有機磷中毒開辟新的治療途徑。 根據(jù)疼痛基因庫的基因序列,用引物primier5軟件和合成正常流產(chǎn)哈赫基因特異性擴增引物設(shè)計,胎兒大腦總RNA提取的RNA為模板,,利用RT-PCR技術(shù)擴增出hAChE ,將純化的PCR擴增產(chǎn)物與克隆載體pUCm-T連接,構(gòu)建克隆表達(dá)載體,將其命名為pUCm-T/AChE,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng),白色菌落篩選,質(zhì)粒DNA小量提取,測定并分析了消化和雙酶序列的PCR鑒定。

 

        用限制性內(nèi)切酶EcoR I和Xho I酶切克隆載體pUCm-T/AChE,回收AChE基因片段,并與經(jīng)同樣酶切的pET-28a(+)表達(dá)載體連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒,將其命名為pET-AChE,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21中,通過Kan+篩選陽性質(zhì)粒,進行PCR鑒定,將BL21(pET-AChE)工程菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),將誘導(dǎo)及未誘導(dǎo)的工程菌全菌蛋白進行SDS-PAGE電泳檢測。根據(jù)改良埃爾曼法(比色法)人血乙酰膽堿酯酶和rHAChE活性檢測,比較。

 

重組人乙酰膽堿酯酶治療有機磷研究結(jié)果。

 

        采用紫外分光光度計測量的總RNA提取,OD260/od2801.8,OD260/od2701.2,表明游離酚殘留蛋白。取lulRNA樣品做甲醛變性凝膠電泳可見28S和18SRNA兩條帶,說明RNA基本完整??寺〉膆AChE編碼序列為1845bp,與GenBank DNA數(shù)據(jù)庫中人乙酰膽堿酯酶基因序列一致。構(gòu)建了克隆表達(dá)載體pUCm-T/AChE和重組表達(dá)載體pET-AChE。SDS-PAGE電泳和Western blot分析表明,分子量約為68.2kda rHAChE,0.75mg/ml的濃度。



產(chǎn)品對比 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪

對比框

在線留言