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RPMI-1640培養(yǎng)基的制備以及說(shuō)明

2013-11-19  閱讀(4181)

  在實(shí)驗(yàn)中我們經(jīng)常會(huì)用到RPMI-1640培養(yǎng)基,但遺憾的是關(guān)于RPMI-1640培養(yǎng)基卻很少有人仔細(xì)研究。RPMI-1640培養(yǎng)基是RoswellParkMemorialInstitute的縮寫,代指洛斯維,1640則是培養(yǎng)基代號(hào)。其中含有10%胎牛血清。
  
  實(shí)驗(yàn)中使用的RPMI-1640培養(yǎng)基通常都需要自己配制。而配制過(guò)程中需要注意到很多細(xì)節(jié),否則就會(huì)影響到RPMI-1640培養(yǎng)基的效果??偨Y(jié)一下關(guān)于RPMI1640培養(yǎng)基的需知,可分為以下幾點(diǎn):
  
  1.配制培養(yǎng)基新制備的三蒸水(即經(jīng)過(guò)三次蒸餾收集的水,一般多用于,生物和醫(yī)療上的檢驗(yàn))是*選擇。一般在試驗(yàn)前當(dāng)天制備,前一天也可。注:調(diào)節(jié)pH值的酸堿溶液也應(yīng)該使用這種水配制。
  
  2.培養(yǎng)液(配制方法不仔細(xì)介紹,自己可查)配好后,先抽取少許放入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),置于37℃溫箱內(nèi)24~48hr,用以檢測(cè)培養(yǎng)液是否有污染。
  
  3.溶解培養(yǎng)基,過(guò)程為將干粉培養(yǎng)基溶于總量1/3的水中,再用水洗包裝袋內(nèi)面兩次,再倒入培養(yǎng)液中,振蕩即可。注:一般不要加熱助溶。
  
  4.補(bǔ)加試劑,即是根據(jù)包裝袋說(shuō)明和試驗(yàn)需要加入NaHCO3(2.0g)、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等試劑。
  
  5.加抗生素,一般青霉素終濃度為100U/ml,鏈霉素為100U/ml。但市售青霉素為80萬(wàn)U/瓶,可溶于4ml體積,所以每一升培養(yǎng)液中加0.5ml即可。市售鏈霉素則為100萬(wàn)U/瓶,可溶于5ml體積,所以每一升培養(yǎng)液中也加0.5ml即可。注:無(wú)鏈霉素的情況下,也可用慶大霉素代替,終濃度調(diào)為50~200U/ml即可。
  
  6.調(diào)pH值,培養(yǎng)基中加水到900ml(在需要加10%小牛血清的情況下),然后用5%NaHCO3調(diào)節(jié)pH到7.2為止。
  
  7.過(guò)濾除菌:zui宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張,上層為0.45um,下層為0.22um,可保證過(guò)濾的效果。注:濾膜正面(即是光面)要朝上。過(guò)濾后分裝于小瓶中(100或200ml)。
  
  8.每次配液,都需要的其他輔助性液體(例如Hanks,胰蛋白酶消化液,PBS,抗生素溶液等)也可以同時(shí)配制,分別再過(guò)濾。
  
  9.每次配液量以兩周左右為zui宜,一次配液不可太多,太多則會(huì)造成營(yíng)養(yǎng)成分(主要為谷氨酰胺)的損失,zui后造成實(shí)驗(yàn)繁瑣或者污染。
  
  10.zui后,必須注意制備培養(yǎng)基的器皿清洗要干凈,烤干后備用(濾器、濾膜、量筒、移液管及盛放培養(yǎng)基的小瓶等存放和轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基液體的器具都應(yīng)進(jìn)行滅菌)。
  
  注意:RPMI-1640培養(yǎng)基中需加入10%的小牛血清。關(guān)于小牛血清加入的注意事項(xiàng)不做仔細(xì)介紹,自己可查。培養(yǎng)基的配制過(guò)程及其注意事項(xiàng)大家都已清楚,但僅是清楚還并不足夠,我們更多的要?jiǎng)邮秩プ?。?shí)踐不僅是檢驗(yàn)真理惟一標(biāo)準(zhǔn),更是檢驗(yàn)一個(gè)人的標(biāo)準(zhǔn)。


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